의약품-무균시험(직접법)

직접법 따로 규정이 없는 한 표 2에 규정된 양의 검체를 그 용량이 배지용량의 10 %를 넘지 않도록 배지에 직접 접종한다. 검체가 항균활성이 있을 때에는 적당한 중화제로 중화시키거나 충분한 양의 배지로 희석하여 시험한다. 대용량의 검체를 사용할 필요가 있을 때에는 접종에 의한 희석영향을 고려하여 고농도의 배지를 쓰는 것이 바람직한 경우도 있다. 적절하다면 고농도 배지를 용기내의 검체에 직접 넣는 것도 가능하다.

가) 유성액제 측정법의 적합성시험에서 적합하다는 것이 증명된 적당한 유화제를 적절한 농도 (예를 들면 10 g/L 폴리소르베이트 80)로 넣은 배지를 쓴다.

나) 연고제와 크림 1 g/L 육제 또는 카제인제 펩톤중성용액과 같은 적당한 무균희석용액에 선택한 유화제를 넣고 유화하여 유화제․무균희석용액(1 : 10)으로 희석한 다음 유화제를 함유하지 않은 배지에 이식한다. 접종된 배지는 14일 이상 배양한다. 배양기간 중에 배양 상태를 수 회 관찰한다. 유성검체를 함유한 배양물을 매일 조용히 흔든다. 그러나 혐기성균 검출을 위해 액상티오글리콜산배지를 쓸 때에는 혐기조건을 유지하기 위해 흔들어 섞는 것을 최소한으로 한다.

관찰과 결과의 판정 배양기간 중 및 최종일에 배지에서의 미생물의 증식유무를 육안으로 조사한다. 검체가 배지를 혼탁시켜 미생물증식의 유무를 육안으로 쉽게 판정할 수 없을 때에는 배양 시작일로부터 14 일 후에 해당 배지의 일부 (1 mL 이상)를 같은 배지의 새로운 용기에 이식하고, 본래의 배지와 이식시킨 배지를 4 일 이상 배양한다.

미생물의 증식이 관찰되지 않을 때 검체는 무균시험에 적합하다. 미생물의 증식이 관찰될 때에는 해당 검체와 관계없는 원인에 의하여 시험이 무효함을 명확하게 증명할 수 없는 한 검체는 무균시험에 적합하지 않다. 아래 조건 중 1 개 이상 해당될 경우 이 시험은 무효로 한다.

가) 무균시험시설의 미생물학적 모니터링 데이터에 문제가 나타난 경우

나) 무균시험 중에 쓴 시험방법을 조사한 결과 문제가 나타난 경우

다) 음성대조 중에 미생물의 증식이 나타난 경우

라) 해당 무균시험으로부터 분리된 미생물을 동정한 다음 그 균종의 증식이 무균시험 실시 중에 쓴 재료 및 용기 모두, 또는 어느 한 쪽에 문제가 있음이 명확히 판단되는 경우

시험이 무효인 것이 판명되면 최초 시험과 같은 수의 용기를 써서 재시험을 행한다. 재시험에서 미생물의 증식이 관찰되지 않을 때 검체는 무균시험에 적합하다. 재시험에서 미생물의 증식이 관찰될 경우에 검체는 무균시험에 적합하지 않다.

무균시험 적합이 요구되는 주사제, 안연고제, 점안제 및 다른 비주사제에 대한 시험 적용 멤브레인필터법을 쓸 때에는 가능하면 용기내의 전량을 쓴다. 단, 표 2에 표시한 양 이상을 쓴다. 필요하면 1 g/L 육제 또는 카제인제 펩톤 중성용액과 같은 적당한 무균용액으로 약 100 mL로 희석한다.

직접법을 쓸 때에는 따로 규정이 없는 한 표 2에 제시한 양을 쓴다. 시험제품의 동일한 검체에 대하여 세균 및 진균에 대한 무균시험을 한다. 한 개의 용기 중의 내용량이 두 시험을 하는데 불충분한 경우는 두 개의 용기 이상의 내용물을 다른 배지에 접종하는데 쓴다.

시험에 필요한 최소 검체수 시험에 필요한 최소 검체수는 로트 크기에 따라 표 3에 표시한 개수를 쓴다.

 

로트당 제조 개수*	따로 규정이 없는 한, 각 배지당 최소 검체수**
주사제
100 개 이하 101 개 이상 500 개 이하 501 개 이상	10 % 또는 4 용기 중 많은 쪽 10 용기 2 % 또는 20 용기 (대용량제제의 경우는 10 용기) 중 작은 쪽
안연고제 및 점안제 등의 비주사제
200 개 이하 201 개 이상	5 % 또는 2 용기 중 많은 쪽 10 용기
1회용 제품의 경우에 주사제에 준한 개수를 채취한다.
고형 벌크제품
4 용기 이하 5 용기 이상 50 용기 이하 51 용기 이상	각 벌크용기 20 % 또는 4 용기 중 많은 쪽 2 % 또는 10 용기 중 많은 쪽
* 로트 크기를 알 수 없는 경우에 여기에 제시한 최대수를 사용한다. ** 한 용기의 내용량이 두 배지에 접종하는데 충분한 양이면 여기에 제시한 용기 수로 한다.

 

용기의 내용량	따로 규정이 없는 한 각각의 배지에 접종하는 최소량
액제
1 mL 미만 1 mL 이상 40 mL 이하 40 mL 초과 100 mL 이하 100 mL 초과 항생물질의 액제	전량 반량, 단, 1 mL 이상 20 mL 10 %, 단, 20 mL이상 1 mL
현탁 또는 유화시켜 쓰는 비수용성 의약품, 크림 또는 연고제	0.2 g 이상
고형제
50 mg 미만 50 mg 이상 0.3 g 미만 0.3 g 이상 5 g 이하 5 g 초과	전량 반량, 단, 50 mg 이상 0.15 g 0.5 g

 

예시 동영상

https://www.youtube.com/watch?v=PC6HqCYLMjU